《植物生理学报》 2020, 56(4): 895-903

一种植物原生质体分离与瞬时转化的方法

赖叶林, 贺莹, 李欣欣*, 廖红

福建农林大学资源与环境学院根系生物学研究中心, 福州350002

通信作者：李欣欣；E-mail: lixinxin0476@163.com

摘　要：

本研究以拟南芥(Arabidopsis thaliana)、本氏烟草(Nicontiana benthamiana)和大豆(Glycine max)为试验材料,通过酶解法结合去除叶片下表皮的预处理, 以及PEG介导的转化, 建立了一种操作简单且高效的原生质体分离和瞬时转化方法, 为目标基因的亚细胞定位分析和基于原生质体为受体材料进行遗传等方面的基础研究提供方法支撑。结果表明, 利用上述方法, 3种植物均能获得较高产量且低破损率的原生质体, 同时避免了原生质体的纯化过程。其中, 拟南芥的原生质体产量最高, 其次是大豆和烟草; 并且, 烟草和拟南芥原生质体转化效率较高,大豆较低, 烟草和拟南芥原生质体的转化效率高达50%以上, 分别是大豆的3.84和3.62倍。进一步的亚细胞定位分析发现, 烟草和拟南芥的原生质体在GFP和RFP共转定位时存在优势, 可用于目标基因的亚细胞定位分析。

关键词：原生质体; 分离; 瞬时转化; 亚细胞定位

收稿：2019-03-24   修定：2020-04-05

资助：国家自然科学基金青年科学基金(31601814)和中国博士后科学基金第九批特别资助项目(2016T90592)。